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            THP-1細胞培養建議

            THP-1細胞培養建議

            一、細胞概述

                 

            THP-1細胞系是1980Tsuchiya等人建立的人單核細胞白血病細胞系。它來自一位急性單核細胞白血病患者的血液,有分化為多種巨噬細胞的能力,是各領域研究常用的細胞系之一。


            THP-1  細胞的特點


              喜歡酸性環境

            在偏酸性環境中,THP-1生長更快,所以當培養基稍微變黃(呈橘紅色)時,是適合細胞生長的,此時補液或半換液即可。

             有密度依賴性

            THP-1細胞密度低時,生長較慢,培養密度維持在50-100萬細胞/毫升為宜;超過200/毫升則需要傳代。

             

             

            二、細胞培養條件

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            三、細胞培養建議

             

            1、細胞復蘇:將凍存管從液氮中取出后迅速放入37℃水浴鍋中搖晃解凍,準備15ml離心管,將完全培養基移取6ml與細胞混合均勻,在1000RPM條件下離心3min,棄去上清液,再加入6ml完全培養基吹勻后重復離心3min,棄去上清液,補加6ml完全培養基吹勻。然后將細胞懸液加入T25培養瓶放入細胞培養箱(37℃,5%CO2)過夜,第二天檢查細胞密度。

             

            2、細胞傳代:當細胞密度達到約8x10^5cells/ml左右時,即可進行傳代。由于是懸浮細胞,可直接將細胞吸出,離心之后傳代。傳代最少濃度不應少于1x10^5 cells/ml。如果用肉眼觀察則將培養瓶平放靜置后觀察鏡下細胞密度達到80%,即可進行傳代。

             

            3、細胞凍存:50%RPMI-1640+40%FBS+10%DMSO 配置細胞凍存液或使用Biochannel細胞凍存液(,將培養瓶中細胞懸液抽出,在1000RPM條件下離心3min,棄去上清液。按照需求將配置好的細胞凍存液加入離心管中吹勻細胞,再分裝凍存管中置于程序降溫盒中在-80℃冰箱中過夜,次日放入液氮中保存。

             

            四、BioChannel 血清培養效果

                 圖片1.png

                  BC-SE-FBS07  優級胎牛血清培養效果

               

                 圖片2.png

                  BC-SE-FBS01  特級胎牛血清培養效果

             

            五、THP-1培養常見問題及解決方案

            Q: 培養過程中細胞發生貼壁怎么辦?

            A: 少量細胞貼壁屬于正常情況,將細胞懸液轉移至新瓶中即可。當貼壁細胞的比例高于20%,說明細胞生長環境有異常,需排查培養箱設置、培養基成分,以及培養器皿是否異常。

            Q: 培養過程中細胞發生聚團怎么辦?

            A: 少量細胞聚團,呈葡萄串狀,屬于正?,F象,特別是細胞密度較低時,易出現這種情況。更換血清品牌或增大血清比例(不超過20%)有助于解決聚團問題。不建議將聚團的細胞吹散,等待密度高時,會自己分散開。

            Q: 培養基里一定要加β-巰基乙醇嗎?

            A: β-巰基乙醇是一種常用的培養補充劑,有抗氧化的作用,可減少氧化應激對THP-1細胞的影響。當細胞密度過大但需要維持時,可適當增加巰基乙醇的比例(不超過標準量的1.5倍)。

            Q: 鏡下觀察時,難以聚焦或估算密度怎么辦?

            A: 懸浮細胞會隨著液體流動,不容易聚焦,靜置5-10分鐘使細胞沉底,之后再輕輕放上顯微鏡觀察,將有助于聚焦和估算細胞密度。

             



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