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            RAW264.7(小鼠單核巨噬細胞白血病細胞)培養建議

            英文名稱:RAW 264.7

            中文名稱:小鼠單核巨噬細胞白血病細胞

            種 屬:鼠源

            組織來源:Abelson鼠科白血病病毒誘導的腫瘤;單核細胞;巨噬細胞。

            生長特性:貼壁生長(胰酶會刺激分化)

            細胞形態:不規則形

            傳代比例:1:2 ~ 1:3

            換液頻率:2~3次/周

            倍增時間:12~30h

            培養體系:DMEM(高糖)+10% Biochannel特級胎牛血清+1% P/S

            培養條件:5%CO2 ;37℃

            凍存條件:Biochannel 細胞凍存液,程序降溫,液氮長期保存。

            培養建議:

            (a)在細胞生長的初始階段,細胞以貼壁的形式生長并呈現出長方體的形態和有“偽足”延伸。隨著培養時間的增加,細胞呈現圓形并以疊加的形式生長。細胞密度達到一定的程度,會有細胞以懸浮的方式散落到到培養基中,鏡下觀察會發現懸浮和貼壁的細胞會同時出現。

            (b)該細胞傳代時不需要用胰酶消化。傳代時,用無菌細胞刮刮拭培養表面將細胞刮落,收集離心后重懸接種到新的培養瓶中。

            (c)該細胞形態上包含松散貼壁的紡錘形和圓形或者立方形。當細胞密度較大時,細胞會輕微脫落變圓或者許多細胞堆積在一起,有些細胞甚至脫落漂浮。這些漂浮的細胞是存活的,在傳代時應收集起來,離心后細胞沉淀可以繼續培養。

            (d)血清質量差異可能引起細胞貼壁能力變化,應選用高質量的胎牛血清。

            (e)該細胞不建議使用胰酶消化,胰酶會刺激分化; 超過3天不傳代細胞容易分化;培養時,存在少量分化細胞,屬于正?,F象。

            (f)若需控制細胞的分化,RAW264.7使用吹打傳代,能更好地控制細胞分化率。

            收貨事項:

            (a)RAW 264.7 細胞貼壁較松,在包裝過程中切勿有劇烈的晃動。

            (b)快遞運輸路上受到顛簸,也可能會脫落。

            (c)脫落的細胞懸浮在培養基中不容易聚焦 。

            收到貨后把細胞放進培養箱靜置兩個小時后觀察細胞,就可以看到了。如果靜置后看到的細胞仍偏少,請將瓶子里的培養基都轉移到離心管里,1200 rpm(約250g)離心3分鐘,即可看到沉淀的細胞。細胞全部脫落,慌亂之下可能會一個細胞都找不著。這個時候離心驗證是最好的方法,RAW 264.7脫落后傾向于抱團,抱團時細胞是活著的,但很難貼壁。記得一定要把聚成團的細胞吹散成單細胞,不然細胞很難重新貼壁。

            常見問題:

            Q: 收貨時細胞出現偽足,或是碎片較多怎么辦?

            A:受到運輸影響,懸浮細胞會短暫性出現形態改變的現象,如偽足等。通過傳代培養,1周左右可以恢復正常。一些細胞在運輸途中死亡而產生碎片,通過傳代離心可以去除。

            Q:培養過程中細胞發生貼壁怎么辦?

            A: 少量細胞貼壁屬于正常情況,將細胞懸液轉移至新瓶中即可。當貼壁細胞的比例高于20%,說明細胞生長環境有異常,需排查培養箱設置、培養基成分,以及培養器皿是否異常。

            Q:培養過程中細胞發生聚團怎么辦?

            A:少量細胞聚團,呈葡萄串狀,屬于正?,F象,特別是細胞密度較低時,易出現這種情況。更換血清品牌或增大血清比例(不超過20%)有助于解決聚團問題。不建議將聚團的細胞吹散,等待密度高時,會自己分散開。

            Q:培養基里一定要加β-巰基乙醇嗎?

            A:β-巰基乙醇是一種常用的培養補充劑,有抗氧化的作用,可減少氧化應激對THP-1細胞的影響。當細胞密度過大但需要維持時,可適當增加巰基乙醇的比例(不超過標準量的1.5倍)。

            Q:鏡下觀察時,難以聚焦或估算密度怎么辦?

            A:懸浮細胞會隨著液體流動,不容易聚焦,靜置5-10min使細胞沉底,之后在輕輕放上顯微鏡觀察,將有助于聚焦和估算細胞密度



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