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            B16-F10(小鼠皮膚黑色素瘤細胞)細胞培養建議

            英文名稱:B16-F10

            中文名稱:小鼠皮膚黑色素瘤細胞

            種   屬:鼠源

            組織來源:器官;皮膚;品系:C57BL/6J;疾??;黑色素瘤

            生長特性:貼壁生長

            細胞形態:梭形細胞樣;上皮細胞樣

            傳代比例:1:2 ~ 1:4

            換液頻率:2~3次/周

            倍增時間:48-72h

            培養體系:DMEM(高糖)+10%FBS+1%P/S

            培養條件:5%CO2;37 ℃

            凍存條件:Biochannel細胞凍存液,程序降溫,液氮長期保存。


            【細胞培養特點】



            1. 該細胞在DMEM(含1.5g/L NaHCO3)培養基中生長良好,大部分品牌的DMEM含有較高濃度的NaHCO3(3.7g/L),若使用DMEM(3.7g/LNaHCO3)培養基培養細胞時需要提高CO2濃度(7%-10%)。

            2. 該細胞我們推薦的基礎培養基是DMEM(高糖)培養基;

            3. 據反映DMEM養B16-F10,細胞會很黑,分泌黑素量比較多;而1640養比較白,黑素分泌量比較少。(依據實驗需求可嘗試更換培養體系,更換時建議留種);

            4.更換為DMEM培養液培養時,請保證血清和培養液質量,不然營養問題會導致細胞不長、生長緩慢以及黑色素大量分泌。


            【常見問題】

            Q: 收貨時細胞出現偽足,或是碎片較多怎么辦?

            A:受到運輸影響,懸浮細胞會短暫性出現形態改變的現象,如偽足等。通過傳代培養,1周左右可以恢復正常。一些細胞在運輸途中死亡而產生碎片,通過傳代離心可以去除(見上文傳代篇)。

            Q:培養過程中細胞發生貼壁怎么辦?

            A: 少量細胞貼壁屬于正常情況,將細胞懸液轉移至新瓶中即可。當貼壁細胞的比例高于20%,說明細胞生長環境有異常,需排查培養箱設置、培養基成分,以及培養器皿是否異常。

            Q:培養過程中細胞發生聚團怎么辦?

            A:少量細胞聚團,呈葡萄串狀,屬于正?,F象,特別是細胞密度較低時,易出現這種情況。更換血清品牌或增大血清比例(不超過20%)有助于解決聚團問題。不建議將聚團的細胞吹散,等待密度高時,會自己分散開。

            Q:培養基里一定要加β-巰基乙醇嗎?

            A:β-巰基乙醇是一種常用的培養補充劑,有抗氧化的作用,可減少氧化應激對THP-1細胞的影響。當細胞密度過大但需要維持時,可適當增加巰基乙醇的比例(不超過標準量的1.5倍)。

            Q:鏡下觀察時,難以聚焦或估算密度怎么辦?

            A:懸浮細胞會隨著液體流動,不容易聚焦,靜置5-10min使細胞沉底,之后在輕輕放上顯微鏡觀察,將有助于聚焦和估算細胞密度。


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