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            森貝伽生物:開學啦,這些細胞常見問題你遇到了嗎?

            一、細胞復蘇時出現狀態異常的原因及解決方式?

            ① 污染:

            培養器皿可能受到細菌、真菌或其他微生物的污染,導致細胞狀態不佳。所以我們需要確保在細胞培養過程中,耗材及操作等都必須嚴格按照無菌要求,避免任何可能的污染源。

            ② 營養不足:

            培養基中的營養物質不足或不平衡,無法滿足細胞的需求。這時候需要根據細胞類型的需求,調整培養基成分,確保提供適當的營養物質和生長因子,保證細胞的正常生長。

            ③ pH值異常:

            培養基的 pH 值偏高或偏低,超過了細胞所能耐受的范圍。一般動物細胞大多數需要輕微的堿性條件,其pH維持在7.4時細胞生長最好。

            ④ 氧氣和二氧化碳濃度:

            培養環境中的氧氣和二氧化碳濃度不合適,會直接影響細胞的呼吸和代謝。在細胞培養過程中需要提供一定量的氣體(氧氣和二氧化碳)。CO2具有調節pH和緩沖的作用,一般提供5% CO2。

            ⑤ 細胞密度過高:

            細胞在培養皿中過于密集,導致缺乏足夠的營養和空間。在培養過程中需要根據細胞類型和培養皿的大小,調整細胞的種植密度,確保細胞能夠獲得足夠的營養和生長空間。

            ⑥ 細胞凍存方式不當:

            細胞在凍存時不恰當導致細胞在-80℃冰箱或者是在液氮當中死亡,從而導致細胞無法復蘇。在凍存細胞前要進行細胞計數,合理使用程序降溫盒進行梯度降溫。


            二、細胞培養中不貼壁了怎么辦?

            ① 消化過度:

            在消化過程中縮短胰蛋白酶消化時間或降低胰蛋白酶濃度,鏡下觀察細胞剝離的狀態,及時終止消化。

            ② 支原體污染:  

            取培養24小時的培養基,檢測支原體。清潔培養箱。如發現支原體污染,丟棄培養物。

            ③ 培養基pH值過堿(NaHCO3分解):

            可以使用無菌醋酸溶液調整pH值或充入無菌CO2來調整培養液的PH值。

            ④ 細胞老化:

            建議復蘇新的保種細胞,一般細胞老化的細胞會持續出現較嚴重的形態變化或者凋亡的情況。

            ⑥ 接種細胞起始濃度太低或太高 。

            建議調節最佳接種細胞濃度。當細胞濃度太高則貼壁位置不夠,細胞濃度太低則勢單力薄,培養基的輕微晃動就可能使其脫落。


            三、關于培養基的常見問題

            ① 為什么培養基顏色會有不同深淺:

            不同品類的培養基中的酚紅指示劑添加含量也是不相同的,所以客戶會看到不同種類的培養基會有不同顏色;一般顏色的深淺為DMEM>MEM>DMEM/F12>RPMI1640>F12。

            ② 培養基在冰箱中為什么顏色會變深:

            因為在空氣中CO2濃度低,而培養基內CO2則會逐漸溢出,HCO3-減少,就會造成培養基偏堿,液體顏色變深。

            ③ 培養基中含有谷氨酰胺的保存條件:

            谷氨酰胺對溫度比較敏感,溫度越高的話降解速度越快。并且谷氨酰胺在溶液中不穩定,一般應置于-20℃冰箱中保存。加有谷氨酰胺的液體培養基應存放在2℃–8℃溫度中保存。

            ④ DPBS和PBS有什么區別:

            這兩者都屬于磷酸鹽緩沖液,成分上只有一點點磷酸鹽的含量差異,均有等滲和調節pH的功能,大多數對于細胞的使用上可以通用。

            ⑤ HBSS和PBS/DPBS有什么區別:

            HBSS緩沖液中鹽成分較PBS和DPBS更復雜,且含有葡萄糖,可為細胞提供簡單的營養,而PBS/DPBS不能提供營養。



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