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            關于A549細胞,您不得不知道的一些操作

            A549細胞來源

            A549細胞又稱為肺癌人類肺泡基底上皮細胞,最早是在1972年由D.J.Giard等人通過一位58歲的白人男性的外植體腫瘤,轉移并培養肺腫瘤組織而得到的。

                   在自然界中,這些細胞是鱗狀的,它們可以通過肺泡擴散傳播一些物質,如水和電解質。如果將A549細胞體外培養,它們會成長為單層細胞,附著或緊貼在培養瓶上。人肺泡上皮細胞株A549可以固定或懸掛在體外的溶液。

            A549細胞培養體系

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            A549細胞特點


                 部分細胞傳代后細胞內出現黑色小點,細胞間隙內出現少量顆粒物或者培養基中浮游著少量死細胞等均為正?,F象,對細胞的增殖及試驗無影響。

            細胞消化或者復蘇操作不當容易導致細胞死亡裂解產生大量碎片及顆粒,進而影響活細胞狀態,注意消化或復蘇過程盡量輕柔,嚴格控制消化時間和復蘇操作規范,傳代或復蘇24h后建議觀察細胞,建議換液一次去除死亡細胞;

             

            A549細胞常見問題處理

            Q: 培養過程中出前黑點問題如何處理?

            A: 細胞內的黑色顆粒是細胞外分泌泡及細胞器折光,這個屬于細胞自身特性,無法清除也無法改變,大部分細胞都會有這種現象,只是不同細胞顆粒多少有區別,細胞培養體系不適應、營養缺乏、滲透壓異常等均可能導致細胞內顆粒增加,建議使用合適的培養條件。

            細胞外的黑色顆粒大部分是細胞碎片和細胞代謝產物,可以先吸走培養基后用PBS潤洗清除,再加新的培養基繼續培養。潤洗不能清除的可以換液清洗后等細胞密度70-80%左右消化處理細胞,消化完成后加完全培養基終止消化,混勻細胞,收集細胞懸液900-1000rpm(150g)離心3min,棄上清。再加5ml PBS重懸細胞,再離心后,用完全培養基重懸接種到新的培養皿。第二次PBS重懸是為了去除碎片,如果平時碎片比較少,傳代時可以省略PBS重懸的步驟;如果碎片很多,建議PBS多洗幾次。

             

            Q: A549細胞最佳消化時間建議多久

            A: 每個客戶用的胰酶活力及消化步驟、試劑都是不一樣的,不能完全規定消化時間,以實際消化效果和客戶經驗為準。

             

            Q:  A549 細胞倍增時間多久?

            A: 該細胞倍增時間較短,生長速度快,注意控制傳代密度,建議1:3-1:4。



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