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            原代細胞與細胞系的培養區別

            首先我們需要區分原代細胞和細胞系的概念:

            原代細胞(primary cell)是指從機體的組織(如人組織、小鼠組織、兔組織等)經蛋白酶或其它的方法獲得單個細胞并在體外進行模擬機體培養的細胞。

            細胞系(cell line)是原代細胞經首次傳代成功后即為細胞系。其中能夠連續傳代的細胞叫做連續細胞系或無限細胞系,不能連續培養的稱為有限細胞系。人類腫瘤細胞,在體外培養半年以上,生長穩定,并連續傳代的即可稱為連續性株或系。

            原代細胞培養之組織取材

            原代細胞最接近和最能反映體內生長特性,適宜用于藥物敏感性試驗、細胞分化等實驗研究。

            部位

            方法

             皮膚和黏膜

            主要取皮片,面積一般2-4cm2


            內臟和實體瘤

            ? 無菌環境;

            ? 熟悉所需組織的類型和部位;

            ? 要避開破潰、壞死、液化部分,以防污染、盡量去除混雜的結締組織。


            血液細胞

            ? 一般多抽取靜脈外周血、或從淋巴組織中分離細胞;

            ? 取材時應注意抗凝。

            骨髓、羊水、胸/腹水細胞


            嚴格無菌、注意抗凝、還要盡快分離培養、離心后,用無鈣、鎂PBS洗兩次,再用培養液洗一次后即可培養,不宜低溫存放。



            動物組織取材-鼠胚組織

            ? 用引頸或氣管窒息致死法處死孕期合適的動物;

            ? 將其浸泡在含75%酒精的燒杯中,5分鐘后取出動物;

            ? 在消毒過得木板上可用無菌的圖釘固定四肢,切開皮膚;

            ? 用無菌操作法解剖取胚。

            動物組織取材-幼鼠胚腎/肺


            ? 幼鼠采用上述方法處死消毒后;

            ? 腹部朝上固定在木板上,先切開游離毛皮并拉開至兩側;

            ? 采用無菌法打開胸腔取肺,或從背部打開腹腔取腎。

            原代細胞的培養方法

            組織塊培養法:

            將剪成的小組織團塊接種于培養瓶(或皿)中,瓶壁可預先涂以膠原薄層,以利于組織塊粘著于瓶壁,使周邊細胞能沿瓶壁向外生長。

            消化培養法:

            該方法是源于消化分散法,將妨礙細胞生長的細胞間質(包括基質、纖維等)去除,使細胞分散形成細胞懸液,然后分瓶培養。

            懸浮細胞培養法:

            對于懸浮生長的細胞,如淋巴細胞、骨髓細胞、和免疫細胞等無需消化,可采用低速離心分離,直接培養,或經淋巴細胞分層液分離后接種培養。

            器官培養:

            從供體取得器官或組織塊后,不進行組織分離而直接在體外的特定環境條件下培養,其特性仍保持原有器官細胞的組織結構和聯系、并能存活。

            注意事項:

            注意事項

            1. 培養液和培養物的比例:一定濃度的培養物僅能支持一定數量的細胞生長,不能盲目增加每單位體積的細胞濃度。

            2. pH:初培養pH應為7.4,培養過程中應不低于7.0。

            3. 培養瓶內的空間:一般培養瓶內培養液與液面上的空間體積之比為1:10。

            細胞系培養

            細胞系常見生長方式分為貼壁細胞和懸浮細胞

            貼壁細胞

            懸浮細胞

            適合包括原代細胞在內的大多數細胞類型。

            適用于已適應懸浮培養的細胞和其他一些無粘附性的細胞。

            需要定期傳代,但易于在倒置顯微鏡下進行目視檢驗。

            較易傳代,但需要每天進行細胞計數和存活率測定,以遵循生長方式;可將培養物稀釋以刺激生長。

            采用酶法或機械方法解離細胞。

            無需通過酶法或機械方法解離細胞

            細胞生長受到表面積限制,從而可能限制細胞產量。

            細胞生長受到培養基中細胞濃度的限制,易于擴大規模培養

            需要使用經過組織培養處理的容器。

            可在未經組織培養處理的培養容器中進行培養,但需要攪動以便進行充分的氣體交換

            可連續收獲產物,用于細胞學研究等多種研究應用

            可批量收獲產物,用于批量生產等多種研究應用

            懸浮細胞傳代步驟

            直接傳代法

            1、待懸浮細胞長滿至80%~90%(細胞懸液變黃),即可傳代;

            2、用吸管吸棄細胞懸液 1 /2~1 / 3;

            3、加入適量的新鮮培養基,繼續培養。

            離心傳代法(在發現有細胞碎片的情況下)

            1、將細胞懸液轉移到離心管內;

            2、150 g 離心 5 min,棄去上層清液;

            3、使用新鮮的培養基重懸細胞;吸管吸取適量細胞懸液,裝入新的培養瓶,      再加入適量的新鮮培養基,繼續培養。

            貼壁細胞傳代步驟

            清洗—消化—終止—標記




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