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            如何應對細胞復蘇不貼壁問題

            凍存的細胞總是受損?復蘇的細胞存活率低?什么時候適合凍存細胞?復蘇細胞有什么要注意的?應對細胞復蘇問題我們有妙招!

            很多科研人會遇到細胞雖然是活細胞但是不貼壁的情況,這個情況其實很大可能就是凍存操作和復蘇操作的細節出了差錯。而要保證細胞凍存和復蘇不受傷害關鍵密寶是“慢凍快融”。

            什么是“慢凍快融”

            慢凍:這一步驟主要是為了防止細胞在冷凍過程中形成冰晶,從而對細胞造成損害。通過緩慢降低溫度,細胞可以逐步脫水,減少胞內冰晶的形成,從而保護細胞結構不受破壞。此外,加入低溫保護劑(如DMSO)也能提高胞膜對水的通透性,降低冰點,延緩凍結過程,進一步減少冰晶對細胞的損傷。

            速融:在復蘇過程中,快速融化是必要的,以防止DMSO在液體狀態下對細胞的毒害作用??焖偃诨苁辜毎杆龠M入復蘇和生長狀態,避免由于緩慢融化導致的水分滲入細胞內形成胞內再結晶,從而對細胞造成損傷。

            凍存避坑指南

            慢凍:這一步驟主要是為了防止細胞在冷凍過程中形成冰晶,從而對細胞造成損害。通過緩慢降低溫度,細胞可以逐步脫水,減少胞內冰晶的形成,從而保護細胞結構不受破壞。此外,加入低溫保護劑(如DMSO)也能提高胞膜對水的通透性,降低冰點,延緩凍結過程,進一步減少冰晶對細胞的損傷。

            速融:在復蘇過程中,快速融化是必要的,以防止DMSO在液體狀態下對細胞的毒害作用??焖偃诨苁辜毎杆龠M入復蘇和生長狀態,避免由于緩慢融化導致的水分滲入細胞內形成胞內再結晶,從而對細胞造成損傷。

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            復蘇操作技巧

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            復蘇后注意事項

            細胞復蘇后只有非常少量細胞貼壁,是不是需要重新復蘇?先不要著急丟掉!可以補加血清和細胞因子,或者每隔 2-3 天換新鮮的生長培養基,經過 2-3 次換液后,大部分細胞就能看到明顯增殖,此時再按照正常傳代操作即可。

            細胞復蘇后剛開始已經貼壁了狀態不錯,后面第二天開始出現死亡現象,這個情況可能是凍存前細胞消化過度,或者凍存中收凍存液殺害細胞凋亡導致的情況。




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